Page 83 - 微生物学免疫学进展
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· 7 8 · 微生物学免疫学进展 2016 年 2 月第 44 卷第 1 期 Prog in Microbiol Immunol,Feb. 2016, Vol. 44 No. 1
组蛋白为抗原的商品化 ELISA 试剂盒在国内外已 毒螺 旋 体 特 异 性 蛋 白。 Sambri 等 [17] 对 TpN47、
经出现多种 [9-10] 。 最早采用全血溶解产物作为抗 Tm2pA、TpN37、TpN17 和 TpN15 等 5 种膜蛋白重组
原,目前 TpN15 ( Tp0171)、TpN17 ( Tp0435)、TpN47 抗原进行 WB 检测血清标本,结果显示特异性、敏感
(Tp0574)和 TpN44. 5(TmPA)是用于梅毒血清诊断 性均高,表明这 5 种重组抗原可以作为全血裂解梅
最主要的膜蛋白。 近年来,Van voorhis 等 [11] 发现重 毒螺旋体抗原的替代物,用于梅毒检测。 许美蓉
组 Tp0453、Tp92(Tp0326)、Tp0257 均具有很强的免 等 [18] 发现,用 WB 检测,TpN47 抗原是最先出现的,
疫原性,分别建立 ELISA 进行临床血清检测评估, 它可作为梅毒的早期诊断指标,然而 TpN15. 5 和
与传统梅毒血清学检测结果有较好的一致性,有望 TpN17 蛋白抗体水平在治疗后发生明显变化,可作
成为梅毒螺旋体特异性血清实验的新的候选诊断抗 为疗效观察的指标。 周秀萍等 [19] 报道重组蛋白
原。 随后,Smith 等 [12] 进一步把 Tp0453 与 Tp0326 rTp0965 是一种高效表达可溶性蛋白,经 WB 分析
组成嵌合物作为包被抗原,建立 ELISA 法,与传统 表明,只与梅毒血清有强的免疫反应,初步显示有良
血清学检测方法相比较,结果证实两种重组蛋白联 好的免疫反应性和特异性。 WB 具有敏感度高,特
合使用使该法具有更高的特异性和灵敏度。 另外, 异性好, 操作简单,不需特殊仪器设备, 结果易判
曾铁 兵 等 [13] 采 用 rTp0971 蛋 白, 建 立 rTp0971- 定,适用于各期梅毒的检测,也可用于早期梅毒、胎
ELISA,伍宁等 [14] 研究用纯化重组 Tp0821 为包被微 传梅毒的检测,是目前理想的梅毒确认试验,但其结
孔,建立间接 ELISA 法,用于检测临床梅毒阳性或 果不能作为判断梅毒治疗效果的依据。
阴性血清标本,rTp0971-ELISA 检测结果显示特异 2. 2. 3 微粒子化学光免疫测定法( Chemilumines-
性为 100% , 敏感性 89. 1% ,rTp0821-ELISA 与传统 cent microparticle immunoassay, CMIA) CMIA 是在
FTA-ABS 法 比 较, 检 测 结 果 显 示 其 符 合 率 达 酶免疫测定(EIA) 技术基础上发展而来,以多种梅
95. 6% ,以上表明 rTp0971 和 rTp0821 均有较好的 毒螺旋体特异性蛋白( TpN15、TpN17 和 TpN47) 为
抗原性,可作为梅毒血清学检测诊断的候选抗原。 固相抗原,并用辣根过氧化物酶(HRP)标记同种蛋
2013 年,蒋传好 [15] 建立 TpF1-ELISA,通过与 TPPA、 白为标记抗原,与患者血清中的梅毒螺旋体抗体形
RPR 的比较,得出 TpF1-ELISA 的敏感性优于 RPR, 成双抗原夹心复合物。 经洗涤, 加入底物 ( 发光
且与 TPPA 检测结果符合度高度一致,说明重组 剂),根据发光强度(RLU) 来判断患者血清中是否
TpF1 有良好的免疫反应性,建立的 TpF1-ELISA 对 含有梅毒螺旋体特异性抗体。 近年来,由美国雅培
梅毒血清学检测是一个重要的补充。 另外,Long 公司等推出检测梅毒特异性抗体的全自动化学发光
等 [16] 采用间接 ELISA 法对重组 Tp0965 反应原性进 法,具有简便、准确、经济的特点,且敏感性、特异性
行分析,其反应性为 94. 5% ,得出其在梅毒各个阶 与其他常用方法结果相符合 [20] 。 禤彩云等 [21] 采用
段有较好的灵敏度,可作为梅毒血清学诊断的候选 雅培 12000sr 检测梅毒螺旋体特异性抗体标本的结
抗原。 TP-ELISA 检测的一般是梅毒血清中 IgM 和 果显示,当 S / CO 值≥10 时,标本无需复查,且准确
IgG 的混合抗体,梅毒患者治愈后,体内特异性抗体 率高达 100% ;而当 S / CO 值<10 时,应进行随访并
TP-IgG 抗体相当长的时间内仍可存在,甚至终身维 结合临床症状加以判断。 Mo 等 [22] 评价 CMIA 检测
持。 因此,TP-ELISA 阳性只能说明曾经感染过或正 梅毒, 与 TPPA 比 较, 结 果 显 示 CMIA 特 异 性
在感染,不能作为疗效监测手段。 99. 5% ,灵敏性为 100% ,可以代替 TPPA 用于大规
2. 2. 2 蛋白免疫印迹法(Western blot,WB) WB 模梅毒血清的筛选确认。
是凝胶电泳与固相免疫相结合的一种分子生物学技 2. 2. 4 胶体金免疫层析法(Colloidal gold immune
术,把梅毒螺旋体破碎,各种蛋白质抗原经 SDS- chromatography ,GICA) GICA 采用纯化重组蛋白
PAGE 凝胶电泳分离并转到硝酸纤维薄膜上。 根据 的梅毒抗原,用胶体金标记,在硝酸纤维素膜上进行
各种抗原相对分子质量大小不同,其在电场中脉动 反应,以双抗原夹心原理快速检测患者血清中梅毒
的速度不同,在硝酸纤维薄膜上所占据的位置也不 螺旋体特异性抗体。 Lin 等 [23] 采用纯化重组 TpN17
一样,与患者血清中对应的抗体免疫反应,由标记的 和 TpN47 蛋白,用胶体金标记,检测 Tp-IgM 特异性
抗原抗体反应就能显示出可见的结果。 梅毒螺旋体 抗原,其特异性和敏感性均很高, 与传统的 FTA-
外膜脂蛋白相对分子质量分别为 47 000、45 000、 ABS 法相比,具有操作快速、简便、价格低廉等特点,
17 000、15 000 已经检测到具有较好免疫活性的梅 因此,该法可代替 FTA-ABS 用于梅毒的复发与感染
组蛋白为抗原的商品化 ELISA 试剂盒在国内外已 毒螺 旋 体 特 异 性 蛋 白。 Sambri 等 [17] 对 TpN47、
经出现多种 [9-10] 。 最早采用全血溶解产物作为抗 Tm2pA、TpN37、TpN17 和 TpN15 等 5 种膜蛋白重组
原,目前 TpN15 ( Tp0171)、TpN17 ( Tp0435)、TpN47 抗原进行 WB 检测血清标本,结果显示特异性、敏感
(Tp0574)和 TpN44. 5(TmPA)是用于梅毒血清诊断 性均高,表明这 5 种重组抗原可以作为全血裂解梅
最主要的膜蛋白。 近年来,Van voorhis 等 [11] 发现重 毒螺旋体抗原的替代物,用于梅毒检测。 许美蓉
组 Tp0453、Tp92(Tp0326)、Tp0257 均具有很强的免 等 [18] 发现,用 WB 检测,TpN47 抗原是最先出现的,
疫原性,分别建立 ELISA 进行临床血清检测评估, 它可作为梅毒的早期诊断指标,然而 TpN15. 5 和
与传统梅毒血清学检测结果有较好的一致性,有望 TpN17 蛋白抗体水平在治疗后发生明显变化,可作
成为梅毒螺旋体特异性血清实验的新的候选诊断抗 为疗效观察的指标。 周秀萍等 [19] 报道重组蛋白
原。 随后,Smith 等 [12] 进一步把 Tp0453 与 Tp0326 rTp0965 是一种高效表达可溶性蛋白,经 WB 分析
组成嵌合物作为包被抗原,建立 ELISA 法,与传统 表明,只与梅毒血清有强的免疫反应,初步显示有良
血清学检测方法相比较,结果证实两种重组蛋白联 好的免疫反应性和特异性。 WB 具有敏感度高,特
合使用使该法具有更高的特异性和灵敏度。 另外, 异性好, 操作简单,不需特殊仪器设备, 结果易判
曾铁 兵 等 [13] 采 用 rTp0971 蛋 白, 建 立 rTp0971- 定,适用于各期梅毒的检测,也可用于早期梅毒、胎
ELISA,伍宁等 [14] 研究用纯化重组 Tp0821 为包被微 传梅毒的检测,是目前理想的梅毒确认试验,但其结
孔,建立间接 ELISA 法,用于检测临床梅毒阳性或 果不能作为判断梅毒治疗效果的依据。
阴性血清标本,rTp0971-ELISA 检测结果显示特异 2. 2. 3 微粒子化学光免疫测定法( Chemilumines-
性为 100% , 敏感性 89. 1% ,rTp0821-ELISA 与传统 cent microparticle immunoassay, CMIA) CMIA 是在
FTA-ABS 法 比 较, 检 测 结 果 显 示 其 符 合 率 达 酶免疫测定(EIA) 技术基础上发展而来,以多种梅
95. 6% ,以上表明 rTp0971 和 rTp0821 均有较好的 毒螺旋体特异性蛋白( TpN15、TpN17 和 TpN47) 为
抗原性,可作为梅毒血清学检测诊断的候选抗原。 固相抗原,并用辣根过氧化物酶(HRP)标记同种蛋
2013 年,蒋传好 [15] 建立 TpF1-ELISA,通过与 TPPA、 白为标记抗原,与患者血清中的梅毒螺旋体抗体形
RPR 的比较,得出 TpF1-ELISA 的敏感性优于 RPR, 成双抗原夹心复合物。 经洗涤, 加入底物 ( 发光
且与 TPPA 检测结果符合度高度一致,说明重组 剂),根据发光强度(RLU) 来判断患者血清中是否
TpF1 有良好的免疫反应性,建立的 TpF1-ELISA 对 含有梅毒螺旋体特异性抗体。 近年来,由美国雅培
梅毒血清学检测是一个重要的补充。 另外,Long 公司等推出检测梅毒特异性抗体的全自动化学发光
等 [16] 采用间接 ELISA 法对重组 Tp0965 反应原性进 法,具有简便、准确、经济的特点,且敏感性、特异性
行分析,其反应性为 94. 5% ,得出其在梅毒各个阶 与其他常用方法结果相符合 [20] 。 禤彩云等 [21] 采用
段有较好的灵敏度,可作为梅毒血清学诊断的候选 雅培 12000sr 检测梅毒螺旋体特异性抗体标本的结
抗原。 TP-ELISA 检测的一般是梅毒血清中 IgM 和 果显示,当 S / CO 值≥10 时,标本无需复查,且准确
IgG 的混合抗体,梅毒患者治愈后,体内特异性抗体 率高达 100% ;而当 S / CO 值<10 时,应进行随访并
TP-IgG 抗体相当长的时间内仍可存在,甚至终身维 结合临床症状加以判断。 Mo 等 [22] 评价 CMIA 检测
持。 因此,TP-ELISA 阳性只能说明曾经感染过或正 梅毒, 与 TPPA 比 较, 结 果 显 示 CMIA 特 异 性
在感染,不能作为疗效监测手段。 99. 5% ,灵敏性为 100% ,可以代替 TPPA 用于大规
2. 2. 2 蛋白免疫印迹法(Western blot,WB) WB 模梅毒血清的筛选确认。
是凝胶电泳与固相免疫相结合的一种分子生物学技 2. 2. 4 胶体金免疫层析法(Colloidal gold immune
术,把梅毒螺旋体破碎,各种蛋白质抗原经 SDS- chromatography ,GICA) GICA 采用纯化重组蛋白
PAGE 凝胶电泳分离并转到硝酸纤维薄膜上。 根据 的梅毒抗原,用胶体金标记,在硝酸纤维素膜上进行
各种抗原相对分子质量大小不同,其在电场中脉动 反应,以双抗原夹心原理快速检测患者血清中梅毒
的速度不同,在硝酸纤维薄膜上所占据的位置也不 螺旋体特异性抗体。 Lin 等 [23] 采用纯化重组 TpN17
一样,与患者血清中对应的抗体免疫反应,由标记的 和 TpN47 蛋白,用胶体金标记,检测 Tp-IgM 特异性
抗原抗体反应就能显示出可见的结果。 梅毒螺旋体 抗原,其特异性和敏感性均很高, 与传统的 FTA-
外膜脂蛋白相对分子质量分别为 47 000、45 000、 ABS 法相比,具有操作快速、简便、价格低廉等特点,
17 000、15 000 已经检测到具有较好免疫活性的梅 因此,该法可代替 FTA-ABS 用于梅毒的复发与感染
