Page 93 - 微生物学免疫学进展
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· 8 8 · 微生物学免疫学进展 2016 年 2 月第 44 卷第 1 期 Prog in Microbiol Immunol,Feb. 2016, Vol. 44 No. 1
力的研发领域,广泛不同的纳米颗粒被研发出来并 相互作用都还缺乏了解。 因此,应当将合理的设计
且作为投递载体或免疫增效剂加以应用,既能够改 与可重复性地生产具有合乎要求特性的纳米颗粒、
善抗原的稳定性又能提高抗原加工和免疫原性,而 颗粒的功能及有效性联系起来就显得越来越重要。
且还能靶向投递抗原和释放抗原。 此外,纳米颗粒 可以预料新技术的采用,例如微流体学技术用于纳
越来越多地用于投递抗原,不仅投递目的抗原,而且 米颗粒的可控性地合成,将促进合适的药用纳米颗
也投递共佐剂,例如多聚(I ∶ C)、CpG 和 MPL。 然 粒的研发。 因此,通过将某些其他的有吸引力的特
而,在疫苗投递和药物投递方面纳米颗粒的应用还 性,例如缓慢释放、靶向投递和选择性投递方法和投
处于早期开发阶段,还面临着许多挑战,包括难以可 递途径整合起来,包括能够满足单剂和无针投递要
重复性的合成具有恒定的合乎要求的特性的非聚集 求的新型疫苗系统就可在不久的将来成为现实。
性纳米颗粒,人们对纳米颗粒的物理特性是如何影
响它们的生物分布和靶向,以及这些特性在组织及 [Zhao L,et al. Vaccine,2014,32(3):327-337.
全身从细胞水平上是如何影响它们与生物系统之间 江丽君 译 陈锦荣 校]
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·文 摘·
检测抗体的靶细胞用于狂犬病疫苗的质控
狂犬病是一种由弹状病毒引起的病毒性人兽共 了慢病毒颗粒:包装构建物( pMDLg / pRRE)、表达
患病,当人们未能及时地治疗时,则可导致 100% 的 VSV - G 构 建 物 ( pMD. G)、 表 达 Rev 的 构 建 物
死亡。 至今已有超过 1 000 万的人口进行了暴露后 (pRSV-Rev)以及自灭活(SIN) 慢病毒载体构建物,
治疗。 这种构建物含有糖蛋白序列(pLV-G)。 转染后 48 h
在病毒感染过程中中和作用是抗体的主要功 将含有慢病毒颗粒的介质收集起来,通过在 2 000
能,而病毒中和抗体水平的评价对于测定免疫程序 rpm 离心 10 min 进行澄清,之后在-80 ℃ 贮存。 在
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的效果或者新疫苗的有效性而言又是主要的因素。 6 孔板上以 3 ×10 细胞/ mL 的浓度将 Vero 细胞接
病毒中和抗体(VNA) 是直接针对狂犬病毒糖蛋白 种于板孔内并放置 18 h,上清物用 1 mL 慢病毒颗粒
(G)的表位,而这种表位是唯一表露于病毒表面的 取代,并放置过夜,然后用新鲜培养基取代上清液。
结构。 在以往所叙述过的方法基础上,使用多步梯度选择
目前中和抗体的测定是在体内使用小鼠中和试 方法,在转导后 96 h,将细胞与嘌呤霉素选择试剂一
验(MNT) 进行的,在这项检测中要使用大量的动 起温育。 所获得的细胞系称为 VERO-G。
物。 在体外测定的标准试验是快速荧光灶抑制试验 使用 G 蛋白特异性单克隆抗体经流式细胞检
(RFFIT)或者是荧光抗体病毒中和试验(FAVN),这 测术测定蛋白表达情况,获得 85% 的阳性细胞,细
项试验要求活的狂犬病毒(RV) 并且仅仅能够在限 胞的膜上存在 G 蛋白的情况是通过使用 FITC 结合
定性 的 参 考 实 验 室 进 行。 酶 联 免 疫 吸 附 试 验 抗体经荧光显微镜镜检而证实的,此后,应用稀释限
(ELISA)对于病毒中和抗体的预测而言是唯一可利 制法对 VERO-G 细胞进行克隆,获得了 50 个克隆,
用的市面上的检测法。 通过流式细胞检测技术对这些克隆进行分析。 阳性
这项研究的目的是为 G 蛋白特异性抗体的测 细胞的百分率比原始细胞系高出 50% 以上。 其中
定开发一种替代性检测法,对其用以往描述过的检 克隆 P1B6 被选择出来以期进行下一步试验,因这
测 VNA 的标准方法加以验证。 一克隆的蛋白表达水平最高。
通过使用慢病毒转导细胞,我们构建了重组
Vero 细胞系,该细胞在浆膜上表达 G 蛋白。 通过用 [Fontana D,et al. Vaccine,2014,32(24):2805-2807
4 种不同的质粒同步地共转染 HEK293 细胞而制备 江丽君译 陈锦荣校]
力的研发领域,广泛不同的纳米颗粒被研发出来并 相互作用都还缺乏了解。 因此,应当将合理的设计
且作为投递载体或免疫增效剂加以应用,既能够改 与可重复性地生产具有合乎要求特性的纳米颗粒、
善抗原的稳定性又能提高抗原加工和免疫原性,而 颗粒的功能及有效性联系起来就显得越来越重要。
且还能靶向投递抗原和释放抗原。 此外,纳米颗粒 可以预料新技术的采用,例如微流体学技术用于纳
越来越多地用于投递抗原,不仅投递目的抗原,而且 米颗粒的可控性地合成,将促进合适的药用纳米颗
也投递共佐剂,例如多聚(I ∶ C)、CpG 和 MPL。 然 粒的研发。 因此,通过将某些其他的有吸引力的特
而,在疫苗投递和药物投递方面纳米颗粒的应用还 性,例如缓慢释放、靶向投递和选择性投递方法和投
处于早期开发阶段,还面临着许多挑战,包括难以可 递途径整合起来,包括能够满足单剂和无针投递要
重复性的合成具有恒定的合乎要求的特性的非聚集 求的新型疫苗系统就可在不久的将来成为现实。
性纳米颗粒,人们对纳米颗粒的物理特性是如何影
响它们的生物分布和靶向,以及这些特性在组织及 [Zhao L,et al. Vaccine,2014,32(3):327-337.
全身从细胞水平上是如何影响它们与生物系统之间 江丽君 译 陈锦荣 校]
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·文 摘·
检测抗体的靶细胞用于狂犬病疫苗的质控
狂犬病是一种由弹状病毒引起的病毒性人兽共 了慢病毒颗粒:包装构建物( pMDLg / pRRE)、表达
患病,当人们未能及时地治疗时,则可导致 100% 的 VSV - G 构 建 物 ( pMD. G)、 表 达 Rev 的 构 建 物
死亡。 至今已有超过 1 000 万的人口进行了暴露后 (pRSV-Rev)以及自灭活(SIN) 慢病毒载体构建物,
治疗。 这种构建物含有糖蛋白序列(pLV-G)。 转染后 48 h
在病毒感染过程中中和作用是抗体的主要功 将含有慢病毒颗粒的介质收集起来,通过在 2 000
能,而病毒中和抗体水平的评价对于测定免疫程序 rpm 离心 10 min 进行澄清,之后在-80 ℃ 贮存。 在
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的效果或者新疫苗的有效性而言又是主要的因素。 6 孔板上以 3 ×10 细胞/ mL 的浓度将 Vero 细胞接
病毒中和抗体(VNA) 是直接针对狂犬病毒糖蛋白 种于板孔内并放置 18 h,上清物用 1 mL 慢病毒颗粒
(G)的表位,而这种表位是唯一表露于病毒表面的 取代,并放置过夜,然后用新鲜培养基取代上清液。
结构。 在以往所叙述过的方法基础上,使用多步梯度选择
目前中和抗体的测定是在体内使用小鼠中和试 方法,在转导后 96 h,将细胞与嘌呤霉素选择试剂一
验(MNT) 进行的,在这项检测中要使用大量的动 起温育。 所获得的细胞系称为 VERO-G。
物。 在体外测定的标准试验是快速荧光灶抑制试验 使用 G 蛋白特异性单克隆抗体经流式细胞检
(RFFIT)或者是荧光抗体病毒中和试验(FAVN),这 测术测定蛋白表达情况,获得 85% 的阳性细胞,细
项试验要求活的狂犬病毒(RV) 并且仅仅能够在限 胞的膜上存在 G 蛋白的情况是通过使用 FITC 结合
定性 的 参 考 实 验 室 进 行。 酶 联 免 疫 吸 附 试 验 抗体经荧光显微镜镜检而证实的,此后,应用稀释限
(ELISA)对于病毒中和抗体的预测而言是唯一可利 制法对 VERO-G 细胞进行克隆,获得了 50 个克隆,
用的市面上的检测法。 通过流式细胞检测技术对这些克隆进行分析。 阳性
这项研究的目的是为 G 蛋白特异性抗体的测 细胞的百分率比原始细胞系高出 50% 以上。 其中
定开发一种替代性检测法,对其用以往描述过的检 克隆 P1B6 被选择出来以期进行下一步试验,因这
测 VNA 的标准方法加以验证。 一克隆的蛋白表达水平最高。
通过使用慢病毒转导细胞,我们构建了重组
Vero 细胞系,该细胞在浆膜上表达 G 蛋白。 通过用 [Fontana D,et al. Vaccine,2014,32(24):2805-2807
4 种不同的质粒同步地共转染 HEK293 细胞而制备 江丽君译 陈锦荣校]
